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精液果糖浓度测定
来源:  作者:本站

  大量的临床研究表明,精液果糖测定可作为男性生殖系统疾患及睾丸内分泌功能的指标之一[1]。我们根据实验室的具体条件,对Polakotk等[2]报道的间苯二酚显色方法进行有效的改进,使本试验操作简便稳定,结果可靠,试用后效果满意,现报告如下。

  1试剂与设备

  1.1试剂:

  1.1.11.0g/L间苯二酚:称取间苯二酚0.1g溶于33%(v/v)盐酸并加至100ml,置棕色瓶中,4℃保存,可存放两周。

  1.1.20.6mol/L氢氧化钡:称取氢氧化钡37.86g溶于蒸馏水,并补足至200ml。

  1.1.30.175mol/L硫酸锌:称取ZnSO4*7H2O10.06g用蒸馏水溶解并补足至200ml。

  1.1.4果糖标准液(200mg/L):精确称取干燥果糖20.00mg,加饱和苯甲酸(2.5g/L)50ml溶解,置100ml容量瓶中,用饱和苯甲酸稀释至刻度(相当于标本浓度2g/L)。

  1.2设备:752C型分光光度计(上海第三分析仪器厂)。

  2方法

  2.1精液浆预处理:收集已液化的精液3000rpm离心15分钟,吸取上层精液浆0.1ml,分别加入0.6mol/L氢氧化钡及0.175mol/L硫酸锌各0.45ml混合(即1∶10稀释)离心,取上清液备用。

  2.2测定:取3支试管标明标准、测定、空白管,分别加入果糖标准液0.5ml、预处理后的精浆上清液0.5ml、蒸馏水0.5ml,于各管加入0.1%间苯二酚盐酸液2.5ml混匀,置沸水加热12分钟取出待冷,用752C型分光光度计,以480nm波长、光径10mm空白调零,读取各管吸光度。

  2.3计算:果糖含量(mg/L)=测定管吸光度值/标准管吸光度值×200×0.5×1/0.05

  3实验与结果

  3.1线性:取浓度400mg/L的果糖标准液分别稀释成400、350mg/L、200mg/L、150mg/L、100mg/L、50mg/L后按上述方法显色。结果表明本法果糖浓度在400mg/L(相当于标本果糖4.0g/L)内所形成的曲线为直线,回归方程为Y=0.1134+0.002X。

  3.2稳定性:果糖浓度为4.0g/L时,反应时间在12分钟吸光度最高,并可稳定至90分钟,其吸光度差别△A为0.002,表明显色稳定性满足实验室要求。反应时间为10分钟,反应未到终点;反应时间为15分钟,反应的吸光度反而下降。

  3.3精密度试验:取同一份精液浆标本分别按上述测定方法平行测定20次,均值为1.101g/L,CV=7.65,SD=0.084。

  3.4回收试验:在果糖浓度为3.25g/L的混合精浆里加入10mg/dL果糖测得平均值为96%。

  4讨论

  本法测定精浆果糖浓度在0~4.0g/L之内线性良好。我们对该方法的实验条件进行摸索,发现在同一果糖浓度下提高间苯二酚的浓度、灵敏度呈下降的趋势。我们曾用不同浓度的间苯二酚显色,结果认为1.0g/L间苯二酚浓度较好,文献报道正常值为0.93~4.98g/L[1],果糖浓度超过4.0g/L显色后反应液呈混浊,因而果糖含量大于4.0g/L标本应稀释。反应时间在12分钟时吸光度最高,文献报道反应温度在90℃10分钟[2],我们认为这种反应条件不容易控制。间苯二酚用盐酸配制成的较为理想,而用无水乙醇配制的试剂反应生成物的吸光度不稳定易下降,且无水乙醇也易燃、易挥发,使配制要的间苯二酚试剂浓度上升,反应的敏感性下降。
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